作者：孙嗣梅; 王利春; 康琳; 王景林可溶性表达蓖麻毒素抗原性纯化western印迹间接elisaa链原核表达质粒重组表达质粒抗原抗体反应pcr方法相对分子量亲和层析法特异性抗体pet序列分析工程菌株目的蛋白显示表达page表达产物检测方法
摘要：用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后,亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3)plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA.该工程菌在30℃经0.4mmol/L IPTG诱导4h后获得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTA相对分子量相符,约32kDa左右.表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达97.53%,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白.Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础.
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