作者：谢琪璇; 余巍; 潘善培; 肖銮娟; 彭雅林; ...人巨细胞病毒hcmv克隆和表达诱导型目的基因毕赤酵母重组质粒嵌合肽表达载体表达量
摘要：为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp),根据其基因序列,设计引物从pPIC9K-rHCMVp上扩增得到目的基因片段,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中.通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中,筛选获得表达量较高的重组菌株,研究了该菌株生长的培养条件,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响.2L发酵罐进行了高密度发酵,经1%的甲醇、pH6.O的条件下诱导48h,最终菌体密度OD600达到180,每升发酵液中含目的蛋白78.7mg,产量比摇瓶提高了4.8倍.rHCMVp可通过高密度发酵大量获得.
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