作者：张春莉; 李景利; 杜柏榕; 李秋生; 有红霞...真核表达载体epo重组人红细胞生成素cho氨甲喋呤mtx二聚体阳性克隆t载体pcr产物
摘要：为构建重组人红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)二聚体真核表达载体,应用PCR方法扩增EPO cDNA,PCR产物克隆入T载体后,经酶切、连接、转化等过程分别构建了3个EPO二聚体的真核表达载体pBT-1c、pBT-2s及pBT-3c,经测序序列完全正确.然后将3个真核表达载体分别转染于COS-7细胞及CHO-dhfr细胞中,用ELISA方法检测,它们在COS-7的瞬时表达量分别为4IU/ml、11.5IU/ml和7.2IU/ml.其中EPO二聚体真核表达载体pBTsv稳定转染CHO-dhfr-细胞后,用氨甲喋呤(MTX)逐渐加压的方法筛选到阳性克隆,表达量可达到4000IU/106cells/72h.
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