作者：王莉; 常忠义; 李平作iptg大肠杆菌特异性e蛋白g蛋白酶基因总蛋白克隆表达纯化
摘要：从轮枝链霉菌Streptoverticillium mobaraense细胞中获得其基因组DNA,用一对特异性的引物通过PCR的方法扩增出转谷氨酰胺酶(transglutaminase,TGase)全长基因,回收片段并将其连接到表达载体pER30a中,转化大肠杆菌DH5α.双向测序表明获得的转谷氨酰胺酶全长基因序列正确.纯化重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),以1mmol/L IPYG诱导5h收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,与阴性对照相比,明显多出了一条蛋白条带,紫外扫描显示此带约占总蛋白量的17%,Western blotting证实此带能够特异性地与兔抗MTG(味之素公司)的抗体发生反应.测得纯化后得到的TGase蛋白的酶活可以达到15.1U/mg蛋白.
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