作者：珠帕尔·木拉提; 杨慧; 蔡青; 赵春礼; 梁...胞浆转基因细胞处理神经细胞鱼藤酮氧化应激n基因农药非转基因
摘要：本研究利用农药鱼藤酮作用于神经细胞,观察鱼藤酮对神经细胞的损伤作用以及线粒体功能障碍与α-synuclein积聚之间的关系.方法:本实验选用人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,实验纽为α-synuclein-GFP基因转染的细胞,鱼藤酮处理的转基因细胞和非转基因细胞,对照组为未处理的SH-SY5Y细胞.通过RT-PCR检测α-synuclein基因转染细胞的基因表达情况.荧光显微镜观察细胞内α-synuclein-GFP表达产物绿色荧光蛋白.MTT法检测各组细胞活性.DCF检测细胞氧应激.HE染色、免疫组化检测α-synuclein在细胞中的状态.电镜观察细胞超微结构的改变.结果:RT-PCR显示转基因细胞α-synuclein基因的表达.荧光显微镜观察显示细胞浆内可见绿色荧光蛋白,绿色荧光分布不均匀,可见蛋白积聚.MTT检测结果显示,与对照组相比,鱼藤酮处理的细胞增殖速度明显减小(P＜0.01).鱼藤酮的浓度为75nmol/L、100nmol/L时,未转基因与转基因的细胞活性相比较,前者的细胞活性低于后者(P＜0.05).HE染色,鱼藤酮处理的转基因细胞胞浆减少、转基因细胞胞浆内也可见自噬体.胞浆内有嗜酸性包涵体样结构.免疫组化可见鱼藤酮处理高表达α-synuclein细胞明显变成梭形并有很长的突起.电镜显示鱼藤酮处理的细胞线粒体肿胀,嵴断裂,胞浆内形成自噬体.DCF检测转基因细胞内存在明显的氧化应激,并随鱼藤酮处理加重.结论:农药鱼藤酮对多巴胺能神经细胞有明显的损伤作用,转基因细胞显示对较高浓度的鱼藤酮损伤有一定的耐受作用.α-synuclein可引起神经细胞的氧化应激并随鱼藤酮处理加重.提示环境因素可能与α-synuclein表达相互作用使多巴胺能神经元氧化应激进行性加重,这可能是引起PD的主要原因.
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