作者：王占斌; 李勍; 严善春; 冯连荣抗神经兴奋肽载体构建蛋白表达生物测定
摘要：蝎体内产生一系列毒素蛋白,ANEPⅢ是其中一种。试验构建重组表达载体p PIC9K-ANEPⅢ,将质粒p NJUTRXA-ANEPⅢ转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导目标蛋白ANEPⅢ,并用Tricine-SDS-PAGE电泳进行定性分析,检测得到8000 k D目的蛋白。通过电转化的方法将p PIC9K-ANEPⅢ转入毕赤酵母宿主菌GS115中,筛选得到一株耐受2.0 mg/m L G418表型为His+Mut+的菌株。经0.5%的甲醇诱导,取不同诱导时间的表达上清液进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析,确认7800 k D毒性目的蛋白已经获得分泌表达,在诱导72 h时表达量最高。对ANEPⅢ基因的原核与真核表达产物进行提取、初步纯化后进行了抗虫试验。结果表明,原核表达产物没有显示出生物活性,真核表达产物具有较好的生物学活性。浓度为1 mg/m L的真核表达产物,喂食舞毒蛾2龄幼虫5 d后,校正死亡率达37.9%,幼虫食叶量下降50%。黄粉虫的生物测定结果表明,喂食1 mg/m L的真核表达产物5 d后,黄粉虫幼虫的校正死亡率为20%。
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