成年大鼠丘脑底核离体脑片的制备方法

作者：孙唐娜; 王文挺; 朱俊玲; 李柱一大鼠膜片钳术脑片丘脑底核神经变性疾病

摘要：目的 建立一种制备健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)离体脑片的方法。方法选取成年SD大鼠,体重280~450 g,给予大鼠4℃氯化胆碱切片液主动脉灌流后取脑,取脑时间尽量控制在30 s内,振动切片机制备含有STN的冠状脑片。同时采用其他保护脑片细胞活性的措施,如人工脑脊液中添加抗氧化剂,脑片制备全程注意保持低温冰浴状态等。利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色法观察神经元活性。通过红外微分干涉相差显微镜(IR-DIC)观察脑片的神经元形态。全细胞膜片钳记录大鼠STN神经元的电生理学指标。结果40倍镜下显示,大量STN神经元轮廓清晰、表面光滑、饱满、有立体感,PI染色为阴性。进行全细胞膜片钳记录时,封接顺利,获得的STN神经元电生理指标如下:静息膜电位为(-46.4±1.26)mV,膜电阻为(493.1±62.29)MΩ,有自发放电的神经元占记录细胞总数的43.8%(28/64),动作电位阈值为(-28.30±1.20)mV,动作电位幅度为(68.00±2.27)mV,动作电位半宽为(0.80±0.06)ms,基强度为(42.0±6.09)pA。结论本方法制备的成年SD大鼠STN离体脑片保证了STN神经元的活性,适用于诸如帕金森病等神经系统退行性疾病动物模型离体机制研究。

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