AChR—IgGFc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达

作者：高洁 常婷 王键 李柱一重症肌无力受体胆碱能iggfc段融合蛋白

摘要：目的构建人AChR—IgGFc段融合蛋白真核表达载体AChR—IgGFc／pAN1782并在CH0k1细胞中表达AChR—IgGFc融合蛋白。方法以人烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）α1亚基全序列为模板，以PCR法扩增AChRa1亚基胞外段主要免疫区基因片段Ha1-121，将其插入真核表达载体pAN1782。将构建的新载体转染至CHOk1细胞，建立稳定表达AChR—IgGFc融合蛋白的cHOkl细胞株，以Western blot法检测AChR-IgGFc融合蛋白表达。结果（1）Ha1-121经PCR法扩增后所获428bp基因片段大小符合预计结果，测序所得核苷酸序列与人类基因库中AChRa1业基胞外段基因片段Ha1-121序列完全一致，未出现点突变或移码突变。所构建的新载体经酶切鉴定证实片段插入正确，载体构建成功。（2）Western blot法检测结果显示转染新载体的CHOk1细胞培养上清液中有AChR—IgG Fc融合蛋白表达。结论成功构建人AChR—IgGFc段融合蛋白真核表达载体，且该融合蛋白可在转染新载体的CHOk1细胞中稳定表达，为下一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定了初步良好基础。

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