作者：石松生 陈春美 杨卫忠 王春华 王锐 金昌...胶质瘤inos重组腺相关病毒载体vegf细胞增殖
摘要：目的探讨携带诱导型-氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）反义RNA重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）载体（rAAV-AsiNOS）对胶质瘤细胞生长增殖的影响以及对iNOS和血管内皮生长因子vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）等表达的影响。方法根据c6细胞培养基成分不同分为3组，即空白组[含10％胎牛血清的改良Eagle培养基（DMEM）培养液，n=4]、β-半乳糖苷酶基因（β-galactosidasegenez，lacz）重组腺相关病毒载体（rAAV—LacZ）组（含有rAAV—LacZ的10％胎牛血清的DMEM培养液，n=4）和rAAV—AsiNOS组（含有rAAV—AsiNOS的10％胎牛血清的DMEM培养液，n=4），C6细胞生长曲线；3组同时进行培养1、3、6、12、24h，应用流式细胞仪（FCM）检测c6细胞中NT阳性细胞百分比、iNOS和VEGF阳性细胞百分比，应用半定量反转录聚合酶链式扩增（RT—PCR）分析iNOS和VEGFmRNA表达。结果一定感染复数的重组病毒载体rAAV．LacZ对c6胶质瘤细胞生长趋势无明显影响．而rAAV．AsiNOS重组病毒载体在转染C6细胞从3d开始出现细胞生长缓慢，与空白组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。FCM检测结果显示，NT、iNOS和VEGF阳性细胞在空白组和rAAV—LacZ组之间差异无统计学意义（P〉0．05）．而rAAV—iNOS组从培养6h开始出现NT、iNOS和VEGF阳性细胞百分比下降，NT百分比分别为9．37％±1．2％．97．3％±0．75％和4．62％4-0．53％；iNOS百分比分别为18．42％±2．17％，14．29％±1．44％和8．31％±1．30％；VEGF百分比分别为7．85％±0．98％，6．32％±0．78％和5．04％±0．41％，较空白组之间差异均有统计学意义（P〈0．05）；半定量RT—PCR分析结果显示，同一时间中，iNOSmRNA在空白组和rAAV—LacZ组之间差异无统计学意义（P〉0．05），而rAAV-iNOS组从培养6h开始出现iNOSmRNA表达下降，分别为0．46±0．04．0．34±0．03和0�
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