作者：薛妮娜; 王春阳; 杨瀚泽; 陈越; 金晶; 陈...荧光偏振hsp90抑制剂蛋白表达纯化
摘要：目的建立HSP90抑制剂的高通量荧光偏振筛选模型。方法以pET24α（＋）-HSP90α转化E.Coli BL21（DE3）,诱导表达并纯化HSP90α蛋白。Western blot鉴定纯化的HSP90α蛋白。以VER00051001为分子探针,依次变化HSP90α浓度和分子探针浓度,4℃孵育不同时间,检测荧光偏振值,建立HSP90α抑制剂的荧光偏振筛选模型。同时采用该模型检测格尔德霉素（Geldanamycin,CA）和NVP-AUY922对HSP90α的亲和抑制活性。结果成功诱导表达并纯化HSP90α蛋白。选用80 n M分子探针,2.01μg/mL HSP90α蛋白建立荧光偏振筛选模型,其Z因子可达0.83。基于该方法,检测GA和NVP-AUY922对HSP90α的亲和抑制活性,其IC_（50）值分别为55 nM和13 nM。结论成功地建立了HSP90抑制剂的荧光偏振筛选模型。
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