作者：兰利琼; 苗琛; 白洁; 徐莺; 王胜华; 唐琳...水稻精细胞优势表达基因rsg6启动子基因克隆基因表达抑制差减杂交技术
摘要：利用已知的RSG6基因序列和GenBank中提供的RSG6前导序列设计引物,通过基因组DNA的PCR扩增得到长度为1 408 bp和1 173 bp的两个RSG6启动子片段PB、PS,测定序列分析发现,PB、PS分别位于水稻第10和第4染色体上,PB、PS序列之间具有较高的同源性,且都含有大量的启动子元件.通过设计带有酶切位点的引物扩增出PB和PS的各两条缺失片段PB1、PB2、PS1、PS2,与质粒pBI221连接后得到中间载体pBI221-PB1、pBI221-PB2、pBI221-PS1、pBI221-PS2,再与质粒pBIN19连接构建出双元表达载体pBIN-GUSB1、pBIN-GUSB2、pBIN-GUSS1、pBIN-GUSS2,转化农杆菌EHA105,感染烟草叶片和烟草花粉,瞬时表达显示缺失片段PB1、PB2、PS1、PS2均具有启动子功能,且PB1、PS1的启动效率较PB2、PS2高.
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