作者：刘百峰; 王晓芳; 徐行; 李春龙; 吕碧涛nogo受体rna干扰脊髓损伤慢病毒
摘要：目的：筛选出高效的NgR（Nogo受体）特异性siRNA，并构建其慢病毒表达载体。方法：按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求，设计、合成4对siRNA，转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞，筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA；将获得的高沉默效率siRNA克隆入慢病毒质粒pRNAT-U6。2／Lenti（SD1259），构建NgR特异性siRNA慢病毒表达载体，然后进行酶切鉴定及基因测序。结果：在4对siRNA中筛选出高沉默效率的NgR特异性siRNA199序列，将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT—U6．1／Neo，构建成Ngn特异性siRNA199表达载体，酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符，目的基因序列准确无误。结论：NgR特异性siRNA199及其慢病毒表达载体构建成功，为进一步观察NgR特异性慢病毒载体RNA干扰抑制大鼠NgRmRNA表达的神经元细胞实验奠定了基础。
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