作者：吕梁; 张子平; 万海付; 孙玉龙; 王艺磊拟穴青蟹荧光定量pcr内参基因稳定性
摘要：为获得适用于研究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)不同发育时期胚胎基因表达的内参基因,本研究采用 3 个内参基因筛选软件 geNorm、NormFinder 及 BestKeeper 对微管蛋白α1A(Tuba1a)、核糖体蛋白 L13(Rpl13)、泛素(UBQ)、核糖体蛋白 S6 激酶(Rps6)、精氨酸激酶(Ak)、3-磷酸甘油脱氢酶(gapdh)、28S 核糖体 RNA(28S)、18S 核糖体 RNA(18S)和延伸因子 1A基因(EF-1α)等 9个常用候选内参基因在拟穴青蟹不同发育时期胚胎的表达稳定性进行分析。geNorm 分析表明, EF-1α和 Rpl13 的表达稳定性最高,并且采用 2 个内参基因同时校正目标基因的定量结果可以达到最优效果;NormFinder分析表明, gapdh和 EF-1α是 9个候选内参基因中表达最稳定的;BestKeeper分析表明, gapdh 的标准偏差和变异系数是 9 个候选基因中最低的。综合 3 个内参基因筛选软件,可以选用 EF-1α,或选用 EF-1α和 gapdh 双内参同时校正拟穴青蟹不同胚胎发育时期各基因的表达情况。
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