作者：张红 陈松林 刘洋 温海深 朱颖半滑舌鳎性别相关基因wtla实时荧光定量pcr
摘要：从半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis）全基因组序列中获得肿瘤抑制基因WT1a的部分序列，然后利用RACE技术克隆了WT1a基因的全长，运用组织学方法，对半滑舌鳎性腺分化早期的组织切片进行了观察，并分析了该阶段WTla的表达特征。克隆结果显示，WTla基因cDNA全长为1886bp，开放阅读框（ORF）长为1470bp，编码490个氨基酸，并且包含KTS三肽，5-UTR和3-UTR分别长为245bp和171bp。在ORF末端发现2个微卫星（SSR）序列和2个跨膜螺旋区域，而在其他物种中未发现这些区域。氨基酸序列分析显示，WT1a基因的保守性很高，与人的同源性高达90％。通过组织切片观察发现，该批半滑舌鳎在56d时性腺开始分化，并且卵巢分化早于精巢。荧光实时定量分析结果显示，WT1a在半滑舌鳎成鱼性腺中表达量显著高于其他各组织，在肝、肾、脾、心脏等组织中有微量表达，并且在成鱼性腺中，雄鱼表达量显著高于雌鱼，雌鱼显著高于伪雄鱼。在胚胎发育各时期以及初出膜后WTla的表达结果显示，在12h（原肠早期）显著升高，20h（神经胚期）达到最高。在性腺分化早期雌雄性腺中的表达结果显示，WT1a在雌雄半滑舌鳎16-66d的性腺中表达量持续平稳升高，在性腺分化时期表达量并没有特殊的变化。这些研究结果说明，WT1a基因是半滑舌鳎性别相关基因，并在半滑舌鳎的性腺分化、发育过程中持续表达，但可能对性腺的分化过程并不起决定作用。
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