作者：姬南京 杨芸菲 丁君 常亚青虾夷马粪海胆溶菌酶基因表达
摘要：本实验采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆得到了虾夷马粪海胆（Strongylocentrotus intermedius）溶菌酶（LYZ）基因的全长cDNA序列。结果表明, 虾夷马粪海胆LYZ基因全长为912 bp, 含有1个480 bp的开放阅读框（ORF）, 编码159个氨基酸, 其中第1？20个氨基酸为信号肽, 蛋白计算分子量为17.69 kD, 等电点为7.75。氨基酸比对分析表明, 虾夷马粪海胆LYZ基因与紫球海胆（Strongylocentrotus purpuratus）和刺参（Apostichopus japonicus）的i型LYZ基因相似百分比分别为91.4%和59.3%, 并且含有i型LYZ基因的保守序列DVGSLSCGP （Y）Y（F）QIK, 所以推断本实验克隆的溶菌酶为i型。采用实时定量PCR方法, 以β-actin为内标, 对其在虾夷马粪海胆各组织中的表达进行研究, 发现LYZ基因在围口膜中表达量最高, 其次是齿间肌、管足、肠、体腔液、雄性性腺和雌性性腺。利用脂多糖（LPS）刺激虾夷马粪海胆, 取刺激后不同时间的海胆体腔液, 对该基因的表达差异进行分析。结果表明, 虾夷马粪海胆的LYZ基因在LPS刺激后8 h时表达量最高, 12 h时开始逐步回落, 至36 h时回落至对照组相近水平。本结果可为虾夷马粪海胆免疫学研究及抗病相关分子标记的开发提供参考依据。
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