作者：徐跑; 俞菊华; 唐永凯; 吴婷婷黄颡鱼p450芳香化酶cdna末端快速扩增法系统发育关系基因表达
摘要：P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶.本研究采用RT-PCR和RACE(Rapid Amplification of cDNAEnds)法,分离和克隆了黄颡鱼(Pelteobasrus fulvidraco)卵巢P450芳香化酶基因HP450arom A,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了分析.结果表明,HP450arom A cDNA全长1914 bp[不包括poly(A)],5′端非翻译区有13 bp,3′端362 bp[不包含poly(A)],阅读框(Open Reading Frame,ORF)1 539bp,翻译成513个氨基酸,计算的蛋白质分子量为58.7 kD.同源性分析显示,HP450arom A的氨基酸序列与其他鱼卵巢P450arom具有60%～90%的同源性,与其他鱼脑P450arom为57%～60%同源,与鸡卵巢和人胚盘P450arom则为51%和52%同源;但芳香化酶高保守区包括Ⅰ-螺旋区,芳香化酶特异保守区Ⅱ和血红素结合区Ⅲ和其他鱼芳香化酶相比同源性分别高达68%～97%、78%～91%和71%～100%.系统发育分析表明,HP450arom A与鱼类卵巢P450arom属于同一分支,黄颡鱼和鲇鱼亲缘关系最近,这和传统的分类方法结论一致.荧光实时定量RT-PCR研究结果显示,HP450arom A在前脑、下丘脑、脑垂体、精巢、肝脏中不表达,只在卵巢中表达.这说明HP450arom A的表达具有组织特异性,并可推测其对卵巢发育起着重要作用.与本室分离的HP450arom B在卵巢的表达量相比,卵巢中HP450arom A的表达量是HP450arom B的18.7倍.
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