作者：刘梅; 兰景超; 王宇; 林海; 张志和; 王成...犬恶丝虫aspat基因克隆原核表达免疫荧光定位
摘要：目的了解犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶（AspAT）基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT（DiAspAT）基因进行了原核表达和免疫荧光定位分析。方法从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到DiAspAT基因序列,通过RT-PCR方法克隆DiAspAT基因,利用相关软件进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET32a（＋）-AspAT并进行诱导表达;表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后进行Western blotting分析;通过免疫组化技术观察DiAspAT蛋白在犬恶丝虫虫体内的定位分布。结果 DiAspAT基因的ORF框长度为1 221bp,编码406个氨基酸,理论相对分子量45.731 8kDa,等电点为8.05,表达的重组蛋白约为64kDa;Western blotting显示AspAT重组蛋白能被犬恶丝虫阳性血清识别;间接免疫荧光染色结果显示,DiAspAT在犬恶丝虫的侧索、皮下组织、肌细胞、假体腔壁、子宫及肠上皮、发育的胚胎中分布。结论成功克隆和表达了DiAspAT基因,并完成DiAspAT在雌性犬恶丝虫成虫上的定位,为进一步了解犬恶丝虫的生理代谢及犬恶丝虫病的诊断和防控奠定基础。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
