作者：杨少华 何洪彬 杨宏军 王长法 高运东 马...牛轮状病毒基因工程亚单位疫苗ltb
摘要：目的构建轮状病毒外膜蛋白VP4、VP7基因与大肠杆菌LTB蛋白基因的重组表达载体，研究重组表达蛋白的免疫原性，为研制犊牛腹泻基因工程亚单位疫苗奠定基础。方法克隆A组牛轮状病毒临床分离株CHLY的VP4、VP7基因和大肠杆菌LTB基因，插入pET32a中构建了4个原核表达载体pET32a／VP7、pET32a／VP4、pET32a／VP7-LTB、pET32a／VP4-LTB，转化到BL21（DE3）中进行表达纯化，纯化蛋白与弗氏佐剂混合免疫10w龄雌鼠，在实验期间对雌鼠进行交配，对其所产乳鼠用150μL10^-6.5／0．1mL TCID20的轮状病毒进行攻毒以研究重组蛋白免疫原性和攻毒保护性。结果重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中以包涵体的形式存在，Bandscan扫描分析结果显示，它们分别占菌体总蛋白的35％、20％、30％、18％，利用Ni-NTA Agarose在变性条件下成功纯化得到高纯度重组蛋白。10w龄雌鼠免疫试验表明rVP4-LTB组激发了最强的免疫反应，rVP4组次之，rVP7-LTB组略高于rVP7，各个免疫组问的差异性不显著（P〉0．05），各实验组IgG抗体水平显著高于空质粒对照组（P〈0．01）。雌鼠所产乳鼠的攻毒实验表明，免疫组雌鼠所产乳鼠腹泻率为13．35％～23．8％，腹泻持续时间为48h～72h，较空质粒对照组明显降低，腹泻症状较轻且症状持续时间明显缩短。四个重组蛋白组攻毒保护率为76．2％～86．7％，rVP7-LTB、rVP4-LTB两组略高于rVP7、rVP4组，但相互间差异不显著（P〉0．05）。结论重组蛋白具有较好的免疫原性，被免疫雌鼠体内产生的中和性抗体可以经被动免疫过程传递至子代，并为仔鼠提供保护。本研究为犊牛轮状病毒基因工程疫苗的研究奠定了一定的基础。
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