作者：朱佑明 罗永艾 李文桂铜绿假单胞菌oprf疫苗
摘要：目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组双歧杆菌（rBb）-OprF疫苗。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株提取总RNA为模板,自行设计引物,RT-PCR扩增获得OprF抗原编码基因,经酶切、连接定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF。转化E.coliBL21（DE3）感受态细胞,抽提质粒行酶切电泳和测序验证后,电穿孔转化到Bb中,构建铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切鉴定,切出4 947bp的载体片段和10 16bp的目的基因片段;以rBb抽提质粒为模板进行PCR扩增可得到1 016bp的oprF基因片段。结论成功构建了铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定基础。
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