作者：徐蕾; 王瑜伟; 朱道银结核分枝杆菌rpf克隆表达纯化
摘要：目的构建结核分枝杆菌复活促进因子B（rpfB）、D（rpfD）、E（rpfE）的原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达和纯化。方法采用聚合酶链反应（PCR）以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板扩增出rpfB（1089bp），rpfD（465bp）和rpfE片段（519bp），并连接在pET32a（＋）载体上，重组质粒用酶切和DNA测序鉴定后，转化到大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达了rpfB，rpfD和rpfE3种蛋白；利用Western-blot鉴定重组蛋白后，纯化目的蛋白。结果双酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符，测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定均发现分别在61kDa、39kDa、41kDa处有特异性蛋白条带。结论成功构建了3种重组表达质粒pET32a（＋）-rpfBv、pET32a（＋）-rpfDv、pET32a（＋）-rpfEv，并获得了3种高纯度的重组蛋白，为以后的深入研究奠定了基础。
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