作者：张先锋; 黄远见; 肖娟; 张志伟; 黄卫国鼻咽肿瘤程序性细胞死亡因子4细胞增殖侵袭
摘要：目的探讨miR-150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4（PDCD4）促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭,进一步揭示miR-150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法 2014年3—6月,培养鼻咽癌细胞株CNE-2,取生长良好的CNE-2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列,连接到含有荧光素酶载体质粒上,检测荧光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pc DNA3.1（＋）-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pc DNA3.1（＋）-PDCD4于CNE-2,48 h后采用Western blotting法检测PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pc DNA3.1（＋）-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pc DNA3.1（＋）-PDCD4于CNE-2,分别于培养24、48、72、96 h后测定其吸光度（OD）值,反映其增殖能力。分别瞬时转染Vector、pc DNA3.1（＋）-PDCD4、miR-150inhibitors、miR-150 mimics联合pc DNA3.1（＋）-PDCD4于CNE-2,采用Transwell侵袭实验检测CNE-2侵袭能力。结果无miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.975±0.112）,miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.588±0.042）,差异有统计学意义（t=7.853,P=0.018）。无miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.992±0.135）,miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.875±0.095）,差异无统计学意义（t=1.461,P=0.281）。转染Vector、pc DNA3.1（＋）-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pc DNA3.1（＋）-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平分别为（0.655±0.058）、（1.147±0.152）、（0.704±0.068）、（0.313±0.036）,差异有统计学意义（F=43.410,P〈0.001）;其中,转染Vector、miR-ctr、miR-150mimics联合pc DNA3.1（＋）-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平均低于转染pc DNA3.1（＋）-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义（P〈0.05）。转染物和时间对CNE-2增殖能力存在交互作用,转染物和时间对CNE-2增殖能力均存在主效应（P〈0.001）。转染Vector、pc DNA3.1（＋）-PDCD4、miR-150 inhibitors、
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