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补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用及其机制研究

作者:苗学红; 王淑玲腺癌细支气管肺泡补肾疏肝方a549细胞细胞凋亡survivin半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

摘要:目的探讨补肾疏肝方对肺腺癌A549细胞的凋亡作用,对肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌、Survivin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA表达的影响。方法将补肾疏肝方制成低剂量(1.25 g/ml)、中剂量(2.50 g/ml)和高剂量(3.75 g/ml)药液。以随机数字表法将大鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、顺铂(DDP)组、联合组(中剂量药液联合DDP),每组10只。对照组于第1~5天给予0.9%氯化钠溶液4 ml/d灌胃;低剂量组、中剂量组、高剂量组于第1~5天给予相应剂量药液4 ml/d灌胃;DDP组分别于第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP(20%);联合组于第1~5天给予中剂量灌胃药液灌胃4 ml/d及第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP(20%)。末次给药2 h后采血,分离血清。A549细胞分别加入各组血清,培养72 h,倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。A549细胞分别加入各组血清,培养24、48、72 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α水平。A549细胞与各组血清共培养72 h后,采用荧光定量PCR检测Survivin mRNA、Caspase-3 mRNA的相对表达量。结果各组血清作用于A549细胞72 h后,凋亡细胞核固缩,且随药液浓度增加凋亡细胞增多。各组血清作用于A549细胞24、48、72h后TNF-α分泌水平比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。其中,低剂量组、中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组作用于A549细胞24、48、72 h后TNF-α分泌水平高于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。各组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F=13.238,P〈0.05)。其中,高剂量组、DDP组和联合组血清作用于A549细胞72 h后Survivin mRNA相对表达量低于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。各组血清作用于A549细胞72 h后Caspase-3 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F=10.814,P〈0.05)。其中,中剂量组、高剂量组、DDP组和联合组�

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