作者：刘坤 罗军 娄繁 马艳骨髓基质细胞成人干细胞细胞培养免疫组织化学
摘要：目的探讨SD大鼠骨髓基质细胞（MSCs）的体外培养方法,为细胞治疗研究提供大量MSCs。方法取幼年SD大鼠股骨及胫骨骨髓,全骨髓法培养至第4代,观察各代生长情况;同时制备第3代细胞爬片行细胞鉴定。结果第1～3代细胞接种后4h即有细胞贴壁,部分细胞呈梭形改变,24h时可见细胞呈长梭形或多边形;成群生长的细胞呈漩涡状或平行排列,3～4d时即可达85%～90%融合;收获细胞平均密度为（3.4～3.6）×10^4个/cm^2,台盼蓝染色拒染率为95%～97%,1～3代细胞总产量分别为4.08×10^6个、2.44×10^7个及2.85×10^8个。第4代细胞生长较前减慢,需5～6d达85%～90%融合;收获细胞平均密度3.0×10^4个/cm^2,拒染率为95%,细胞总产量为1.42×10^9个,较原代细胞扩增近2000倍。第3代细胞免疫组化鉴定结果：CD105^＋细胞占61.9%,CD44^＋占45.4%,CD29^＋占16.8%,CD45^＋占8.2%,CD31^＋占13.7%,CD34^＋占8.3%,CD11b^＋占1.5%。结论全骨髓培养适合于MSCs体外的大量扩增,可满足细胞治疗研究的需要。
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