作者：薛正楷; 杨根庆; 张宿义; 倪斌siga基因sigb基因易错pcr高抗性产己酸菌
摘要：以Lysinibacillus fusiformis为出发菌,分别转染SigA和SigB突变基因,获得耐高乙醇和低pH胁迫的优良己酸产生菌。以pET32a（＋）-SigA/SigB为模板,采用均匀试验优化SigA/SigB易错聚合酶链式反应（epPCR）扩增体系中的Mn2＋和Mg2＋浓度,通过epPCR获得ep-SigA/SigB突变基因,与载体pBE3-MCS连接后,构建L.fusiformis-pBE3-ep-SigA/SigB突变菌体库,将两种菌体库在pH值2～5和乙醇含量2%～12%条件下进行筛选。结果表明,L.fusiformis-pBE3-ep-SigB重组菌株耐受最高乙醇含量为8%左右,最低耐受pH值为2.5左右;当乙醇含量为8%、pH值为3.5时,L.fusiformis-pBE3-ep-SigB重组菌株的己酸产量达到（254.35±39.74）mg/100 m L,显著高于工程菌株L.fusiformis-pBE3-ep-SigA的己酸产量（P〈0.01）,且为出发菌L.fusiformis己酸产量（93.62±10.33）mg/100 m L的271.68%,表明L.fusiformis-pBE3-ep-SigB重组菌株具有较强的抗高乙醇浓度和低pH值胁迫产己酸的能力。
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