作者：王蕾; 汪俊卿; 薛乐; 李丕武; 王腾飞; 苏...谷氨酸棒杆菌代谢工程赖氨酸pcr敲除载体基因片段同源臂重组菌抗性基因
摘要：以谷氨酸棒杆菌（ CO iynebacte_riumg/ufamicum） 23604编码赖氨酸胞内转运蛋白基因tysP为敲除对象,利用重叠PCR技术将 tysP基因的上下游同源臂融合,并构建了由木糖启动子Pw和毒素蛋白基因mazF组成的筛选盒,同时无缝克隆连接至带有卡那霉素 抗性基因的pTOPO载体中,经电转化及两次同源单交换筛选,实现tysP基因的无痕敲除.结果表明,经过卡那霉素抗性筛选、木糖二次 筛选及基因组PCR鉴定后,成功获得tysP基因缺失菌株C. g/utamicum 23604A（ysP;发酵后C. g/ufam’cum 23604AfysP赖氨酸产量较对 照菌株产量提高了 10.8%.该实验以大肠杆菌毒素蛋白基因mazF作为反向筛选标记的敲除载体,实现谷氨酸棒杆菌tysP的高效敲除; tysP基因的敲除使得赖氨酸不能进入胞内而在胞外积累,从而达到增产赖氨酸的目的.
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