作者：王晓钧; 魏丽丽; 相文华; 张晓燕; 吕晓玲...马传染性贫血病毒驴强毒株感染性分子克隆强毒株构建驴酶活性测定中国病毒基因限制性内切酶
摘要：马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)驴强毒株DV是一株经过驴体传代获得的而具有超强毒力的毒株,对马和驴均可100%致死.用PCR方法分段扩增了DV其前病毒基因,将包含全基因片段的3个基因克隆以限制性内切酶消化后顺次连接克隆到pLG338上,命名为pD70344.将此克隆体外转染驴胎皮肤细胞和驴白细胞,连续盲传3代并以反转录酶活性测定,RT-PCR鉴定其病毒活性,透射电镜观察发现细胞培养物中存在大量典型病毒粒子,证明获得了1株具有感染性的EIAV病毒粒子,命名为pD70344V.经序列测定确认了本试验首次构建了1株完全来源于EIAV强毒基因的感染性分子克隆,将此克隆病毒接种驴,可以引起典型的马传贫症状并导致试验动物死亡.该分子克隆的建立为进一步考察病毒的毒力与基因的关系提供了良好的平台.
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