作者：牛建新; 朱军; 马兵钢; 覃伟铭; 王小兵; ...库尔勒香梨苹果茎痘病毒cdna探针检测技术
摘要：以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对2种总RNA提取方法进行了比较研究,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究,结果表明,当探针浓度为400 ng·ml-1,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6 h,可获得最高灵敏度.进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好,基本无背景.Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好.对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,2种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号.
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