作者：肖伟; 徐梅珍; 谷丰; 蒋伦伟; 王义华东乡野生稻过氧化物酶柱层析酶活性
摘要：过氧化物酶与植物体内活性氧的清除和逆境适应性反应密切相关,为了深入研究过氧化物酶在植物抗逆反应中的重要作用,以东乡野生稻叶片组织为材料,采用浸提、盐析、透析和柱色谱法分离纯化POD蛋白,采用聚丙烯凝胶活性电泳检测蛋白,利用愈创木酚法研究POD的活性和酶学特性。结果表明,经磷酸缓冲液浸提、40%~80%硫酸铵盐析、再经Sephadex G-100凝胶柱层析等步骤,从东乡野生稻叶片组织分离制备得到POD1同工酶组分,酶蛋白的纯化倍数为16.49,比活力为568.80 U/mg。聚丙烯凝胶活性电泳检测仅呈单一POD1同工酶带,属于单一组分。POD酶Km为1.26 mmol/(L·min),最大反应速度Vmax为17.51 mmol/(L·min),最适宜的pH 5.0,最适宜温度35℃~45℃,Cu^2+和Zn^2+对POD有较强的激活作用,而Fe^3+对POD活性有一定的抑制作用,POD酶活性受20%的甲醇、乙醇和丙酮等有机试剂抑制。
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