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10种绣线菊DNA的提取及RAPD反应体系的优化

作者:房慧旺 刘庆华 王奎玲 刘庆超 唐启和绣线菊属dna提取rapd

摘要:旨在筛选出绣线菊属RAPD反应的最佳体系,为绣线菊属植物种质资源遗传多样性和亲缘关系的研究奠定基础。试验以10种绣线菊属植物为材料,采用改良CTAB法进行冬芽和嫩叶的总DNA提取并对影响RAPD扩增效果的因素进行优化。通过单因素优化筛选出最佳的20μl反应体系:10×Taq buffer 2μl.Taq酶1.0U,0.15mmol/LdNTP,DNA 2ng/μl,引物0.2μ mol/L,Mg^2+2.0mmol/L;反应程序:94℃预变性4min,然后进行40个循环:94℃变性45s,37℃退火1min,72℃延伸1min,最后72℃延伸5min.4℃终止反应。结果发现,采用改良CTAB法所提取绣线菊冬芽的DNA达到RAPD反应的要求,筛选体系扩增出清晰稳定的多态性条带,可用于对绣线菊属遗传育种方面的研究。

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中国农学通报

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