作者：刘延琳; 蒋思欣; 何秀萍; 李华; 张博润重组表达质粒lea基因酿酒酵母构建球菌乳酸含量显著性分析转化子重组质粒调控元件强启动子穿梭质粒大肠杆菌筛选鉴定page目的基因杂交检测hplcmlf酶基因终止子酵母菌亮氨酸色氨酸
摘要：苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶.笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建,利用来自重组质粒pLmleA的mleA基因,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒pYELmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58.酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定.SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中.获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量,采用t检验进行差异显著性分析,结果表明nleA基因进行了功能性的表达,将L-苹果酸转化成L-乳酸,L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著,L-乳酸的生成量为1002-1106mg/L,苹果酸的相对降低率为19.16-22.34%.
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