作者：刘特 赖东梅 程蔚蔚 邹刚 罗诚祖 刘志学精子dna从头甲基化转移酶甲基cpg结合蛋白2实时荧光定量pcr
摘要：目的通过体外分离成熟的精子，利用实时荧光定量PCR（qRealTime—PCR）检测其是否表达DNA从头甲基化转移酶（DNMT1／3a／3b）及甲基CpG结合蛋白（MeCP2），为精子中甲基化表观修饰研究提供依据。方法体外采集健康男性志愿者的精液标本，利用精子上游收集法获得具有活性的成熟精子。通过SYBR Green／PI双染色法，利用流式细胞术（FCM）检测精子样本的质膜完好性及其活性。抽提精子的总RNA，逆转录PCR获得cDNA，利用qRealTime—PCR鉴定精子甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的mRNA表达情况。结果SYBR Green／PI双染色和流式细胞仪检测发现，利用上游收集法可以收集SYBR Green＋／PI一的精子占总精子数的（94．513±1．120）％，表明该方法可以收集到质膜完好且活性强的精子。qRealTime—PCR结果显示，此样本精子中DNA从头甲基化转移酶的表达比较明显，而甲基CpG结合蛋白的表达量相当低。其中DNMT1的mRNA表达量较高（0．272±0．045，P〈0．05），DNMT3a和DNMT3b的表达水平比较弱[（4．930±0．01）E-006，（6．500±1．7）E-005，P〈0．05]，而MeCP2几乎不表达【（2．12±0．91）E-006，P〈0．05】。结论利用qRealTime-PCR可以比较快速方便的检测出此次精子样本中DNA从头甲基化转移酶和甲基CpG结合蛋白的mRNA表达水平。
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