作者：景雯; 童瑾muc5ac糖基化大分子拥挤折叠聚集
摘要：目的:研究大分子拥挤环境对不同糖基化程度的黏蛋白(MUC5AC)在复性过程中折叠和聚集的差异效应。方法:首先对哺乳系统表达的天然MUC5AC进行酶切去糖基化并利用蛋白拥挤试剂牛血清白蛋白(BSA)以及多糖拥挤剂聚乙二醇2000(PEG2000)、聚蔗糖70(Ficoll70)和葡聚糖70(Dextran70)体外模拟大分子拥挤环境。将盐酸胍(GdnHCl)诱导变性的去糖基化蛋白(d-MUC5AC)及天然蛋白(n-MUC5AC)分别加入上述四种大分子拥挤体系中复性,25℃室温条件下,紫外分光光度计连续监测复性过程中其在488 nm光吸收的聚集变化。结果:质量浓度高(ρ=200 g/L)的大分子拥挤试剂通过增加部分折叠中间体的错误聚集从而降低蛋白复性产率,而质量浓度相对较低(ρ≤100 g/L)的大分子拥挤试剂能使蛋白很好的复性。同时,在相同浓度的同种拥挤试剂中,d-MUC5AC复性产率均高于n-MUC5AC,而异常聚集的程度则低于n-MUC5AC。结论:细胞内的大分子拥挤环境可不同程度降低MUC5AC的复性产率,并且对加剧糖基化MUC5AC的错误折叠和聚集的影响更显著。
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