作者：魏锁成 韦敏 巩转娣阿拉瑞林gnrh受体垂体基因表达生物信息学雄兔
摘要：目的：探讨GnRH-A主动免疫对垂体GnRHR、FSHβ-和LHβ-基因表达和生物信息学特性的影响,进而研究GnRH-A的作用机理。方法：30只日本大耳白兔（Oryctolagus cuniculus）随机均分为三组,在EG-Ⅰ和EG-Ⅱ皮下注射1.0 ml（100μg/ml）GnRH-A抗原,EG-Ⅱ于20天以相同剂量加强免疫一次,对照组不做任何处理。70天颈动脉放血致死实验兔,无菌采集垂体。从兔垂体中提取总RNA,GnRHR,FSHβ-和LHβ-mRNA基因扩增、克隆和测序,实时荧光定量PCR分析mRNA基因的表达。用DNAMAN、Tmpred、SignalP、TargetP、Expasy等生物信息学分析软件和在线工具,对GnRHR序列和蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽及二级结构等进行分析和预测。结果：EG-Ⅰ和EG-Ⅱ的GnRHR mRNA低于对照组（P〈0.01）,EG-Ⅱ又低于EG-Ⅰ（P〈0.05）;EG-Ⅰ和EG-ⅡFSHβ-mRNA和LHβ-mRNA极显著低于对照组（P〈0.01）,EG-Ⅰ与EG-Ⅱ间也具有显著差异（P〈0.05）。GnRHR核苷酸为1 179 bp,与NM-001082738的同源性达96%,核苷酸中含A 28.7%,C 24.9%,G 19.0%,T 27.5%。Gn-RHR的线粒体转运肽、信号肽及转运肽长度发生了明显改变。与NM-001082738的比较显示,GnRHR mRNA的核苷酸、氨基酸、分子量、脂肪指数和平均疏水性均变小,而不稳定指数、α螺旋和β折叠数均增加。结论：GnRH-A免疫可明显降低雄兔垂体GnRHR、FSHβ-和LHβ-mRNA基因的表达,而且对GnRHR的生物信息学特性具有一定的影响,加强免疫作用更明显;GnRHR是一种含有信号肽的不稳定的疏水性跨膜蛋白。
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