作者：王选年; 周继勇; 杨艳艳; 邢广旭; 李青梅...克伦特罗单克隆抗体免疫学特性
摘要：目的:建立抗克伦特罗(CL)单克隆抗体杂交瘤细胞系,制备CL单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.方法:用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA,形成结合抗原BSA-CL;以BSA-CL免疫BALB/C小鼠,应用杂交瘤技术建立分泌CL单克隆抗体细胞株;用体内诱生腹水法生产CL单抗,硫酸钠盐析法提纯.应用抗小鼠同种型抗体测定单抗的同种型,用竞争性ELISA和胶体金膜层析试验测定CL单抗的反应特异性和反应动力学.结果:筛选出C-4G1、C-2H6、C-2D6和C-4C94株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗,其单抗的间接ELISA效价分别为5×10-5、3×10-4、6×10-4、2×10-5;同种型分别为IgG1/κ、IgG1/κ、IgG2a/κ、IgG2a/λ.C-4G1的亲和力常数K=1.68×108L/mol,C-2H6的亲和力常数K=1.3×108L/mol.经WestGold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合.C-4G1单抗对CL的半数抑制浓度(IC50)为7.94ng/ml,对沙丁胺醇(Sb)的IC50为1000ng/ml,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC50均≥6400ng/ml;C-4G1单抗与Sb的交叉反应性为0.79%,与异丙肾上腺素的交叉反应性为0.12%,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性.结论:用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备了半抗原CL的单克隆抗体并可用于竞争性ELISA试验检测CL.
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