作者：李丹; 乔群; 王晓军; 钱建平人脂肪间充质干细胞基因治疗腺病毒慢病毒
摘要：目的：比较重组腺病毒、慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白对体外培养的人脂肪来源干细胞（hADSCs）的转导效率和外源基因表达差异。方法：原代分离培养hADSCs并鉴定，应用Ad5F35-EGFP及LV—EGFP以MOI=0、25、50、100、200、400、800感染hADSCs，在1、3、7、14、21天应用荧光显微镜、流式细胞仪观察检测表达EGFP细胞阳性率。MTT法检测转导对hADSCs增殖的影响。YonKossa染色、油红O染色检测体外诱导转导EGFP的hADSCs向成骨及成脂方向分化能力。结果：hADSCs细胞表面标记CD31、CD34、CD45、CD106和HLA-DR阴性，CD29、CD44、CD49d、CD105、CD166阳性。荧光显微镜观察Ad5F35-EGFP感染hADSCs后（1～7天）可见EGFP高表达，此后逐渐减弱；LV—EGFP感染hADSCs后21天，仍可见EGFP高表达。流式细胞仪检测Ad5F35-EGFP、LV-EGFP对hADSCs转导效率与MOI值呈正相关。MTT显示Ad5F35-EGFP在高MOI值（800）检测A值与对照组相比差异显著（P〈0．01）。转导EGFP的hADSCs经体外诱导14天可向成骨、成脂方向分化。结论：与腺病毒相比，慢病毒能够更为安全、有效地感染体外培养hADSCs，并长期表达外源基因，是研究基因修饰hADSCs的理想载体。
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