7种鼠传病原体多重PCR检测方法的建立与应用

作者：康央; 宋秀平; 张燕君; 刘起勇; 栗冬梅鼠传病原体多重pcr毛细管电泳温度转换pcr人兽共患病

摘要：目的应用QIAxcel毛细管电泳系统建立一种能够同时检测7种鼠传病原体的多重PCR检测方法。方法应用微生物数据分析云平台(https://analysis.mypathogen.org/)中'special marker gene'工作流,筛选恙虫病东方体、嗜吞噬细胞无形体、莫氏立克次体、土拉弗朗西斯菌、贝氏柯克斯体、问号钩端螺旋体和巴尔通体特异基因,据此设计引物。根据温度转换PCR原理构建特异性嵌合引物,建立多重PCR反应体系,应用QIAxcel毛细管电泳系统对扩增产物进行检测,评价该体系灵敏度、特异性和可重复性。通过对模拟样品和野外样品进行检测,评价该方法对样品的检测能力。结果特异性检测显示,每种病原体扩增均只出现单一目的条带,无交叉反应;多引物单模板灵敏度检测限为11~76拷贝/μl,多引物多模板灵敏度检测限为20~200拷贝/μl。经样品检测显示,多重PCR法检测能力与单重实时荧光定量PCR法相当,优于普通单重PCR法。结论运用QIAxcel毛细管电泳系统成功建立鼠传病原体多重PCR检测方法,可同时高效、快速检出7种病原体,为相关鼠传疾病的诊断、监测和流行病学调查提供有效手段。

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