汉坦病毒G2糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其在免疫诊断中的应用

作者：朱国献; 朱函坪; 梁伟峰; 姚苹苹; 朱智勇汉坦病毒g2免疫诊断应用杆状病毒转移载体包膜糖蛋白肾综合征出血热重组表达载体免疫荧光诊断聚合酶链反应间接免疫荧光昆虫细胞表达感受态细胞模板设计基因片段质粒载体碱法提取质粒转染技术检测

摘要：目的构建汉坦病毒(HV)Z10株包膜糖蛋白G2基因的重组表达载体,探索其在昆虫细胞中的表达及在免疫荧光诊断中的应用.方法以质粒pUCm-Z10M为模板设计引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增Z10株G2基因片段,将G2片段克隆入pUCm-T质粒载体,碱法提取质粒pUCm-Z10-G2,酶切后将回收片段插入杆状病毒转移载体pFastBacHTa,构建重组体pFastBacHTa-Z10-G2,重组体转化感受态细胞E.coli DH10Bac后,经2轮筛选,提取重组质粒转染昆虫细胞sf9,并用间接免疫荧光技术检测表达的G2蛋白.结果获得含有编码HV Z10株的包膜糖蛋白G2基因的重组质粒,转染昆虫细胞表达出G2蛋白,与肾综合征出血热(HFRS)阳性血清反应,昆虫细胞内呈现特异性环状荧光.检测40份HFRS血清,与全病毒细胞抗原片的符合率为95％.结论成功构建HV Z10株包膜糖蛋白G2基因的表达载体,并在昆虫细胞中表达.可利用重组G2蛋白检测HV感染.

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社