作者：王华; 梁骥; 王法佳; 周磊; 马艳; 张宇飞...探针克隆测序
摘要：目的构建与骨肉瘤细胞高亲和性与特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库,用于骨肉瘤临床特异性诊断。方法体外合成40 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNAs);骨肉瘤细胞(U-2 OS)作为目标细胞与文库ssDNAs反应;指数富集配体的系统进化(SELEX)技术用于筛选富集与靶细胞结合的寡核苷酸;聚合酶链反应(PCR)技术与亲和层析技术用于次轮反应文库的制备;应用荧光光谱跟踪筛选过程;对最后的筛选序列进行克隆、测序与保存。结果十一轮至十三轮筛选后的ssDNAs荧光光谱曲线显示了有意义重叠,因此结束筛选;对十三轮筛选的ssDNAs进行了克隆测序,依据一级结构的同源序列建立了寡核苷酸探针组群。结论应用SELEX技术最终从高通量的随机文库中获得了与U-2 OS具有高度亲和性的寡核苷酸适配体,适配体库的建立不仅仅用于骨肉瘤的特异性诊断,也将为探针-载体-抗肿瘤药物复合体的研制与实施骨肉瘤定向治疗搭建了可行性平台。
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