作者：朴春姬; 孙晓玲; 刘丽波; 李林芳; 刘辉; ...肺癌溶瘤腺病毒肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体放射治疗细胞存活率
摘要：[摘要]目的探讨携带人TRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL，联合X线照射对A549细胞生长的影响。方法将质粒pPE3-hTRAIL与pSG500用Lipofectamine2000共转染至293细胞内同源重组，包装出的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL，采用PCR法进行鉴定，并在293细胞中大量扩增病毒，采用50％组织培养感染计量法测定病毒滴度，以MOI为5的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL感染A549细胞24h，用RT—PCR法检测hTRAIL基因在肿瘤细胞中的表达。用不同MOI值（0．01—40）的CNHK500-hTRAIL感染A549细胞，感染5d，通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测其对A549细胞的细胞存活率，以便确定适宜的感染滴度。用CNHK500-hTRAIL感染A549细胞，感染后48h，用不同剂量的X线（1和2Gy）照射，照射后3d，通过MTT比色法检测CNHK500-hTRAIL联合X线照射下A549细胞的细胞存活率。结果PCR法鉴定表明溶瘤腺病毒CNHK500内携带hTRAIL基因，制备的CNHK500-hTRAIL病毒滴度为3．25×10^9PFU／ml，且CNHK500-hTRAIL携带的hTRAIL基因在A549细胞中有效表达。经不同MOI值CNHK500-hTRAIL感染A549细胞，细胞存活率为64．26％～96．02％。CNHK500-hTRAIL感染联合不同剂量X线照射组细胞存活率较单纯X线照射（1和2Gy）和单纯CNHK500-hTRAIL感染组明显降低（P〈0．01），细胞存活率分别为50．77％和45．56％，增敏效应比值（E／O）为1．5和1．6，均大于1．4。结论成功构建了携带hTRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL，CNHK500-hTRAIL感染与X射线联合照射对A549细胞生长有协同抑制作用。
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