作者：祁冬冬; 陈英利; 郭建壮; 朱贵明; 张涛; ...4t42肽肿瘤抑素腺病毒载体绿色荧光蛋白
摘要：目的构建携带有肿瘤抑素相关T42肽（以下简称T42肽）基因的重组腺病毒载体，并转染HEK293细胞中进行病毒包装，最终感染SKBR3乳腺癌细胞，体外四倍体T42肽（4T42）抗SKBR3乳腺癌细胞的效果。方法利用同尾酶连接技术将T42肽进行两次克隆形成4T42，并将其亚克隆至穿梭质粒pEC3．1（＋）-EGFP中，获得重组质粒pEC3．1（＋）-EGFP-4T42。体外重组至骨架载体pAd／BLOCK-iTrM-Dest（pAd-BL-Dest），获得重组质粒pAd-EGFP-4T42。将该重组骨架质粒转染HEK293细胞，利用RT-PCR方法和荧光显微镜观察标志蛋白-绿色荧光蛋白的表达情况以判断T42转染成功与否。利用病毒倍比稀释法利用荧光显微镜检测病毒滴度，用重组腺病毒感染SKBR3乳腺癌细胞。采用流式细胞仪检测感染重组腺病毒的SKBR3胞凋亡率，MTT实验检测感染重组腺病毒的MCF细胞的生长情况。结果重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确，重组腺病毒获得成功包装，纯化的病毒滴度为4＋100DRP／ml。重组腺病毒rad-EGFP-4T42感染MCF细胞后较对照组未转染空白组细胞凋亡率高（P〈0．05）；Ad-EGFP-4T42质粒转染组与对照组相比，明显抑制MCF细胞生长（P〈0．05）。结论体外4T42肽具有显著促进SKBR3乳腺癌细胞凋亡和抑制SKBR3乳腺癌细胞生长的作用。
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