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逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I在软骨细胞中的表达

作者:宋之明 张绍昆 孙洋 任琦逆转录病毒载体软骨细胞基因转移

摘要:目的探讨逆转录病毒载体介导人胰岛素样生长因子-I(human insulin-like growth factor-I,hIGF-I)体外转染兔软骨细胞后软骨细胞hIGF-I的表达情况及其生物学行为变化。方法将构建的含有目的基因的逆转录病毒载体pLNC-IGF-GFP体外转染兔关节软骨细胞,经G418筛选阳性克隆,采用RT-PCR及免疫化学染色检测转染软骨细胞中hIGF-I的表达情况,并在荧光显微镜下观察标记基因GFP的表达情况。采用MTT法、流式细胞仪、免疫细胞化学染色、二甲基亚甲蓝法及ELISA法对转染hIGF-I后的软骨细胞的增殖能力及表型进行检测。结果 G418筛选后获得的软骨细胞阳性克隆,经RT-PCR和免疫细胞化学检测表明hIGF-1基因在mRNA和蛋白质水平得到稳定表达,荧光显微镜下观察转染的软骨细胞可激发出绿色荧光,证明转染成功。转染软骨细胞株的增殖能力、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的分泌水平,在转染后6 w内均高于同时间点未转染的软骨细胞,差异具有显著性(P〈0.05)。结论逆转录病毒载体能有效地将hIGF-I基因转染至兔软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃,能够在较长时间维持软骨细胞表型,为进一步研究软骨缺损的组织工程修复和基因治疗打下基础。

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