作者：刘荣福 占鹏程 李博安重组质粒构建鉴定
摘要：目的探讨HIF-1α与前列腺癌发病机制之间相关性提供研究工具。方法采用Trizol法裂解细胞,提取HIF-1α且以该RNA为模板逆转录为cDNA,然后行PCR处理扩增HIF-1α基因功能片段区域,克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,转化至大肠杆菌DH-5α,小提质粒,酶切凝胶电泳鉴定,序列测定,经鉴定为正确序列后中抽质粒,采用Fugene试剂转染至前列腺癌细胞PC-3,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1α的前列腺癌细胞系pcDNA3.1-HIF-1α-PC-3,采用Western印迹鉴定重组质粒的表达。结果 PCR扩增基因片段大小为2.89 kb,克隆至真核载体pcDNA3.1,酶切凝胶电泳可见两个条带,大小大约为5.3 kb和2.89 kb,与预期的大小相符合,序列测定与Genbank公布的一致,Western印迹验证其在细胞内能表达。结论重组质粒pcDNA3.1-HIF-1α能够在前列腺癌PC-3表达,构建成功,为研究HIF-1α与前列腺癌提供了一个工具。
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