作者：唐智 安宇 齐晓岚 肖雁 单可人 官志忠sirna神经母细胞瘤细胞淀粉样蛋白前体蛋白
摘要：目的用RNA干扰技术抑制神经型尼古丁受体（nAChR）α3亚单位基因表达并观察对神经细胞淀粉样蛋白前体蛋白（APP）代谢的影响。方法设计并体外合成α3nAChR的特异性编码siRNA序列的寡核苷酸,退火后克隆至pSliencer3.1-H1neo质粒中,构建重组质粒α3nAChR pSilencer3.1-H1neo。将α3nAChR pSilencer3.1-H1neo转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α3nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化;并测定分泌型APP、总APP蛋白表达的变化。结果成功构建α3nAChR siRNA表达质粒,转染后经G418筛选获得稳定转染重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α3nAChR mRNA及蛋白表达量均降低（抑制率分别为98%和66%）;分泌型APP表达下降,总APP水平比较表达水平无显著性差异。结论α3nAChR siRNA表达质粒能特异性抑制α3nAChR基因表达,α3nAChR可能通过增加α-分泌酶对APP的切割发挥神经保护作用。
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