作者：盖晓东 罗宏 历春 冯凯plxsn基因治疗抗血管生成逆转录病毒载体
摘要：目的构建携带Tum-5基因的逆转录病毒载体并对其进行包装，获得稳定的产毒细胞系。方法采用RT—PCR法从胎肾组织中扩增Tum-5基因片断，并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN中进行PCR、双酶切和测序鉴定。利用电穿孔方法将获得的重组质粒转染PA317细胞，经G418筛选抗性克隆，收集病毒上清后感染NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果PCR、酶切证实Tum-5基因克隆至逆转录病毒载体pLXSN，Tum-5基因测序结果和原始序列相同。重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞，RT—PCR证实转染后的PA317细胞上清液中存在携带人Tum-5基因的病毒RNA，病毒滴度为2．05×10^4cfu／ml。结论成功的构建了携带人Tum-5基因的逆转录病毒载体，获得了稳定的产毒细胞系。
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