作者：闾宏伟 陈淑华 阳国平 朱晒红 邓昊 邢晓...重组腺病毒s1p2受体短发夹rna人肺动脉内皮细胞
摘要：目的为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制，构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体。方法设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸（ss oligo），经变性退火为双链寡核苷酸（ds oligo）插入穿梭质粒pRNAT-H1.1／Shuttle载体，测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞（HPAEC），通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1．1／Shuttle-shRNA，提取质粒DNA，经双酶切，回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRN段，亚克隆到腺病毒表达载体（pAdeno-X），筛选出正确重组子，转染HEK293A细胞，收集重组的腺病毒，测定病毒滴度，通过Western blot方法检测s1P2受体沉默效果。结果测序结果证实所构建的pRNAT-111．1／Shuttle-shRNA质粒正确，并从4对ds oligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA，经亚克隆到腺病毒表达载体。转染人肺动脉内皮细胞后，Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果。结论成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
