作者：孙聪 洪敏 韩业超 王少华 邓志会 刘佳stat3rna干扰293细胞神经胶质瘤细胞
摘要：目的观察针对STAT3基因的RNAi腺病毒表达载体对大鼠神经胶质瘤细胞的干扰效果,为探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础。方法设计针对STAT3编码区的短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,克隆到PGEM-T中,构建重组体,再对重组质粒进行酶切鉴定,DNA测序分析后再克隆到穿梭质粒PDC316中,通过Lipofectamine2000的介导和腺病毒包装质粒PBHG共转染至人胚肾HEK293细胞株中,经同源重组后获得重组腺病毒rAD-STAT3,应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,以50%组织培养感染剂量法（TCID50）测定病毒滴度。以阴性为对照,转染到大鼠神经胶质瘤（C6）细胞,Western印迹法检测STAT3蛋白质表达量的改变,RT-PCR法观察STAT3基因表达改变。结果酶切鉴定和测序分析均提示STAT3靶向RNAi病毒表达载体构建成功,阳性病毒载体转染后C6细胞STAT3基因表达及蛋白质表达均较阴性转染的对照组显著下降。结论STAT3靶向RNAi腺病毒表达载体成功构建,并能有效抑制C6细胞中STAT3基因表达。
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