作者：林平 邹海峰 于靖 边淑玲 刘紫君 于晓光cgrp克隆表达
摘要：目的利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽（CGRP）的衍生物（CGRP-VY），并初步鉴定其生物学活性。方法以pETC-GRP重组质粒为模板，用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段，将该基因片段定向克隆到pET-32 a（＋）载体上，构建pETC-GRP-VY重组质粒，转化E-.coli JM109菌株，经扩增提取重组质粒，酶切和测序鉴定；将鉴定正确的重组质粒pETC-GRP-VY转化E.coli BL21 trxB（DE3）pLysS菌株，经IPTG诱导后，收集并裂解菌体，SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达；通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验，初步鉴定CGRP-VY扩张血管的活性，并与重组CGRP进行活性比较。结果获得了含有CGRP成熟肽编码基因序列（111 bp）及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列（6 bp）的重组质粒pETC-GRP-VY，符合预期结果；经诱导后在E.coli中表达出21.2kD的融合蛋白，初步证明其粗提物具有扩张血管的功能。结论成功获得具有生物学活性的融合蛋白CGRP衍生物（CGRP-VY），为进一步进行其降血压功能研究奠定了实验基础。
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