作者：李凡东; 邹承伟; 雷印胜; 范全心rna干扰质粒生物起搏器
摘要：目的 构建抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA，sbRNA）真核表达质粒（pEGFP6-1kir2.1），观察RNAi对大鼠心室肌细胞kir2.1 mRNA和蛋白表达情况和搏动频率的影响。方法 选择5个针对大鼠心肌细胞kir2.1基因的RNA干扰位点，分别设计合成5对相应的寡核苷酸链，形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体，得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6—1kir2.1，转染大鼠心肌细胞，转染后72h RT-PCR和Western-b1ot检测kir2.1 mRNA和蛋白表达情况，倒置显微镜下观察细胞的搏动情况。结果 转染后72h，实验组心肌细胞kir2.1 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组（P〈O.01），两对照组无明显差异。转染后72h，实验组细胞搏动簇搏动频率较转染后48h避一步增快，两对照组无明显变化。结论 真核表达质粒pEGFP6-1kir2.1能明显抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的表达，提高大鼠心肌细胞的自律性。
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