作者：武兆忠; 刘敏; 冯鉴强mg63细胞opg表达成骨样细胞rna干扰护骨素rna基因定向克隆
摘要：目的探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogen receptor α subunit ERα)后,对17β-雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响.方法利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA,体外合成siRNA基因,并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer 4.1-CMV.以脂质体法转染ERα siRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中,鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERα siRNA转染的MG63细胞或未经ERα siRNA转染的MG63细胞,RT-PCR法检测OPG mRNA的表达水平.结果双酶切法鉴定重组质粒后,RT-PCR法鉴定ERα siRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达.不同浓度的17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA的表达,其中以10-7mol/L的作用最强.但经ERα siRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后,17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA表达的作用消失.结论 17β-E2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达.
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