作者：高斌 符伟国 竺挺 张祥满 董智慧 王玉琦胚胎干细胞内皮细胞细胞分化
摘要：目的：比较二维法和三维法体外诱导小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC）分化为高纯度内皮细胞（endothelialcell,EC）的效率。方法：分别用二维法和三维法体外诱导小鼠ESC向EC定向分化,以胎肝激酶-1（fetal liver kinase 1,Flk-1）作为标志物进行流式分选;增加血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）浓度并对阳性细胞加以人工分选以进一步纯化。评估两种方法诱导的分化效率,并采用反转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reac-tion,RT-PCR）、免疫荧光法及DiI标记的乙酰化的低密度脂蛋白（DiI-Ac-LDL）吞噬试验等方法来评估ESC来源的EC（ES-DEC）的生物学行为。结果：二维法流式分选的Flk-1阳性细胞比例显著高于三维法（P〈0.05）。Flk-1阳性细胞在二维培养体系中呈现鹅卵石样的内皮样细胞和条索状的平滑肌样细胞,经人工分选和纯化后可得到高纯度的形态单一的并可传代培养的ESDEC。两种方法分化的ESDEC均可形成管状结构、表达EC特异性细胞表面标志物,并且DiI-ac-LDL吞噬实验阳性。结论：两种方法均可诱导小鼠ESC定向分化为EC,二维法更为简单有效。增加VEGF浓度并对Flk-1阳性细胞进行人工分选有助于纯化ESDEC。
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